Aislamiento, purificación y caracterización parcial de la C-ficocianina-620 obtenida a partir de la Spirulina platensis

Número: 
Autores/Authors: 
Yoania Cabranes Campos, José Marcial Lagomasino Rodríguez, José Antonio Lagomasino Carreras
Palabras Claves / Key words: 
cianobacterias, ficobiliproteínas, ficocianina, aloficocianina, bilinas, ficobilisomas, cromatografía de intercambio fónico, Spirulina platensis, cyanobacteria, phycobiliproteins, phycocyanin, alophycocyanin, bilins, phycobilisomes, ionic exchange chromatography
Resumen: 
La Spirulina platensis posee gran cantidad de ficobiliproteínas, dentro de las que se hayan la ficocianina y la aloficocianina, las cuales se asocian para formar complejos macromoleculares denominados ficobilisomas . Las ficobiliproteínas son pigmentos-proteínas coloreados y fluorescentes que forman parte de los complejos antenas cosechadores de luz de cianobacterias (algas verdes-azules). Estas cromoproteínas tienen unido covalentemente tetrapirroles lineales, las bilinas, relacionadas estructuralmente con la biliverdina. Las ficobiliproteínas por sus propiedades fluorescentes son utilizadas en la industria, en la biotecnología y en la medicina . El método de extracción de ficobiliproteínas de la biomasa de Spirulina platensis utilizado fue el de congelación-descongelación a -20 ÉC . La C-ficocianina se purifica por cromatografía de intercambio aniónico en gel DEAE Sepharosa Fast Flow y posteriormente, se comprueba su pureza mediante una electroforesis en gel de poliacrilamida (8 a un 25 %) y una cromatografía líquida de alta presión. Para la caracterización parcial del hexümero de C-ficocianina, se disocian sus subunidades alfa y beta, se separan en filtración en gel y se verifica su pureza por electroforesis en gel de poliacrilamida (8 a un 25 %) . Posteriormente, se estima el peso molecular del hexümero y de sus subunidades . Como resultado se obtiene el hexümero de C-ficoc--anina puro con un peso molecular en 229 kDa y las subunidades alfa y beta, también puras, con un peso molecular de 17,92 y 19,85 kDa respectivamente .
Abstract: 
Spirulina platensis has a big quantity of phycobiliproteins, such as phycocyanin and allophycocyanin . They are components of a macromolecular complex called phycobilisome . The phycobiliproteins are colored and fluorescent pigment-proteins which constitute the light-harvesting antenna complexes in cyanobacteria (blue-green algae) . These chromoproteins have covalently attached linear tetrapyrroles, bilins, structurally linked to the biliverdin . For their fluorescent properties, phycobiliproteins are used in industry, biotechnology and medicine . The extraction method of phycobiliproteins from biomass of Spirulina platensis was by freeze-unfreeze at -20 ÉC . The C-phycocyanin was purified by anionic exchange chromatography using gel DEAE Sepharose Fast Flow and then its purity was verified by electrophoresis (8 to 25 % polyacrylamide) and high pressure liquid chromatography . For the partial characterization of the C-phycocyanin hexamer, its alpha and beta subunits, were separated by gel filtration . Their purity was proved by electrophoresis (8 to 25 % polyacrylamide) . Later, the molecular weight of the hexamer and its subunits, was estimated. The pure C-phycocyanin with 229 kDa and the alpha and beta subunits, also pure, with 17 .92 and 19 .85 kDa were obtained respectively.
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