Desarrollo de un Sistema ELISA para cuantificar IgG de ratón tomando como base la tecnología IgY

Número: 
Autores/Authors: 
Esteban J. Gutiérrez Calzado, Tomás Samón Chávez, Gustavo Sierra González, David Higginson Clarke, Gustavo Rodríguez Silva, Rüdiger Schade
Palabras Claves / Key words: 
inmunoglobulina de yema de huevo, inmunoglobulina de gallina, anticuerpo de yema de huevo, anticuerpos aviares, IgY, egg yolk immunoglobulin, Hen’s immunoglobulin, egg yolk antibody, avian antibodies
Resumen: 
Se conoce que desde 1893, se había descrito un experimento en el que se demostraba que en el proceso de inmunización de gallinas, el resultado consistía en la transferencia de anticuerpos específicos hacia la yema de sus huevos. Tomando como base este conocimiento, este trabajo se enfocó en demostrar que los anticuerpos de yema de huevo obtenidos a partir de gallinas inmunizadas con una preparación comercial de IgG de ratón pueden constituir una alternativa a sus similares en mamíferos al conjugarse con la enzima peroxidasa y utilizarse como reactivos en técnicas ELISA para la determinación de anticuerpos monoclonales murinos del tipo IgG. Para esto, se desarrollaron esquemas de inmunización en paralelo en gallinas y conejos a los que se les aplicaron diversas dosis del antígeno (IgG de ratón) demostrándose que las gallinas son capaces de brindar títulos de anticuerpos aunque menores que en el conejo, sí razonables en sus yemas de huevo contra este antígeno, útiles para procesos posteriores. Se demuestra que el método del m-peryodato de sodio es aplicable a los anticuerpos de yema de huevo (IgY) para conjugarlos a la enzima peroxidasa para su uso exitoso en inmunoensayos como el ELISA. El Sistema ELISA desarrollado sobre la base de los anticuerpos IgY mostró en su desempeño algunas ventajas a su similar desarrollado con conjugado de anticuerpos de mamíferos. Este trabajo demuestra que la obtención de anticuerpos IgY en este caso, es una fórmula que reduce los costos de producción de conjugados enzimáticos al menos tres veces, lo que conjuntamente con los elementos bioéticos la convierte en una vía atractiva para complementar los procesos tradicionales de producción de anticuerpos
Abstract: 
of a hen results in the transfer of specific antibodies (Abs) into the egg yolk was demonstrated. Taking in mind this knowledge, this work has been focused on the immunisation of hens with commercial mouse IgG to prepare IgY polyclonal antibodies and label them with horse radish peroxidase (HRP) to use as alternative similar mammal’s antibodies in ELISA tests to determine murine monoclonal antibodies. Immunisation schedules were carried out in rabbits and hens simultaneously with different dosages of commercial preparation of mouse IgG. Rational titres of antibodies were obtained from egg yolk in comparison to rabbit’s antibodies. Here, it is demonstrated that sodium m-periodate method is also useful to offer IgY enzymatic conjugates with characteristics similar to those obtained from mammal’s source. The performance of ELISA assay by egg yolk’s conjugate showed several advantages in comparison to similar one with rabbit’s conjugate in parameters like linearity and precision. Finally, it is demonstrated that IgY Technology is an alternative to produce enzymatic conjugates at lower cost and can be accepted as an attractive way for traditional mammalian polyclonal antibodies technology
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