Diseño de un procedimiento para la obtención y caracterización de disoluciones de Hemo purificadas /Design of aprocedure to obtain and characterize purified heme

Número: 
Autores/Authors: 
Maritza González Pérez, José Alberto Gómez Pérez, Yanisleydis Otero Cabrera, Yenisleidy Revilla Fernández.
Palabras Claves / Key words: 
hemo, purificación, diálisis, hemoglobina bovina, caracterización, heme, purification, dialysis, bovine hemoglobin, characterization.
Resumen: 
Los productos que contienen hierro en forma de hemo (PM-616 Da), son útiles para el tratamiento y prevención de la anemia. El objetivo de este trabajo fue diseñar un método para obtener una disolución de hemo, separar sus fracciones y caracterizarla con técnicas espectroscópicas. Esta disolución, se obtuvo a partir de sangre bovina estéril, utilizando métodos físicos y químicos. Para separar por tamaño las moléculas que la componen, se utilizaron membranas de diálisis de 1 000 Da, 6-8000 Da y 15 000 Da y tubos de centrífuga Amicón con membrana de 10 000 Da. Se emplearon dos lotes ajustados a pH-4,4 y 5,0 respectivamente. La disolución dializada se trató con HNO3 86 % y se concentró para determinar hierro (Fe) por Absorción atómica AA. La diálisis se realizó con 2 L de agua destilada y se concentró por calor, tratándose igualmente con HNO3. La pureza se determinó por espectrometría de masa (EM) empleándose como patrón la hematina porcina (PM - 633,49 Da, Sigma). Como resultado, el hidrolizado a pH - 4,4 obtuvo un 82,32 % de moléculas menores de 1 000 Da, 2,72 % entre 1 000 y 6 - 8 000 Da, 4,24 % entre 6 - 8 000 y 15 000 Da, y 10,72 % por encima de 15 000 Da. Esta última fracción se atribuye a agregados que pudiera presentar el hemo en forma monomérica. En conclusión, se obtuvo una disolución de hemo asociado a péptidos, menores de 1 000 Da con alto grado de pureza demostrado por EM.
Abstract: 
Products containing iron as heme (MW-616 Da), are useful for the treatment and prevention of anemia. The objective of this work was to design a method to obtain a solution of heme, separate the fractions and to characterize it, by spectroscopic techniques. This solution was obtained from sterile bovine blood, using physical and chemical methods. To separate molecules by size composing, dialysis membranes 1000 Da, 6-8000 and 15,000 Da and centrifuge tubes membrane Amicon 10,000 Da were used. Two batches adjusted to pH 4.4 and 5.0 respectively were used. The dialyzed solution was treated with 86 % HNO3 and concentrated to determine iron (Fe) by atomic absorption (AA). Dialysis was performed with 2 L of distilled water and concentrated by heat, a treated as the same form with HNO3. Purity was determined by mass spectrometry (MS) being used as a standard swine hematin (PM-633.49 Da, Sigma). As a result, the hydrolyzate to pH 4.4 obtained a 82.32 % of molecules less than 1 000 Da, 2.72 % between 1000 to 6-8 000 Da, 4.24 % between 6 - 8 000 and 15 000 Da, and 10.72 % above 15 000 Da. This last fraction is attributed to aggregates that could present the heme in monomeric form. In conclusion, it was obtained with this method, a solution with 82 % of heme associated to peptides, lesser than 1 000 Da, with a high degree of purity, demonstrated with MS.
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