Generación de hibridomas productores de anticuerpos monoclonales contra la proteína de membrana externa U (OmpU) de Vibrio cholerae

Número: 
Autores/Authors: 
Gustavo Falero, Boris L. Rodríguez, Irelio Rodríguez, Edith Suzarte, Oscar Otero, Niury Núñez, Daily Serrano, Rosa L. Solís, Arlenis Moreno, Rafael Fando
Palabras Claves / Key words: 
Anticuerpos Monoclonales, OmpU y Vibrio cholerae, Monoclonal Antibodies, OmpU and Vibrio cholerae
Resumen: 
La proteína de membrana externa U (OmpU) de Vibrio cholerae es la más abundante en la superficie de los vibriones, y se piensa que debe jugar un importante papel en la patogenia de este microorganismo, ya que su expresión es regulada por el mismo sistema que regula la expresión de los dos principales factores de patogenia del microorganismo: la toxina colérica y la pilina corregulada con la toxina. Con el objetivo de poder estudiar la OmpU de Vibrio cholerae, se generaron anticuerpos monoclonales (AcM) específicos contra ella. El antígeno utilizado para la obtención de elevados títulos de anticuerpos específicos en el suero de ratones BALB/c, fue la OmpU purificada de Vibrio cholerae fusionada a 6 histidinas. En la generación de los hibridomas se emplearon procedimientos normalizados de fusión celular. Los análisis primarios y secundarios de los híbridos generados se realizaron mediante la técnica de inmunoensayo de enzima ligada (ELISA), mientras que la caracterización de los anticuerpos monoclonales obtenidos se hizo utilizando las técnicas de Western blot y ELISA. También se obtuvo fluido ascítico en ratones BALB/c para producir los anticuerpos monoclonales, los cuales se purificaron mediante Cromatografía de Afinidad. Se obtuvieron y caracterizaron cuatro hibridomas productores de AcM. Los hibridomas 1F11 y 1B10 secretaron anticuerpos de la clase IgM mientras que el 3D8 y el 9H12 secretaron anticuerpos de la clase IgG1. Todos los AcM reconocen una proteína de 42 kDA en Western blot correspondiente al producto del gen Ompu fusionado a una cola de 6 histidinas. Adicionalmente, el AcM secretado por el hibridoma 3D8 parece ser específico para un epitope oculto en la OmpU, ya que no reconoce la proteína intacta en la superficie de Vibrio cholerae. Este es el primer reporte de producción de anticuerpos monoclonales específicos contra la OmpU de Vibrio cholerae
Abstract: 
The most abundant surface protein of Vibrio cholerae is the outer membrane protein U (OmpU) and is believed to play an important role in the pathogenesis of the microorganism, due to its expression is regulated by the same system that regulate the production of cholera toxin and the toxin-corregulated pilus, the main virulence factors of Vibrio cholerae. With the aim to study the OmpU of Vibrio cholerae, specific monoclonal antibodies (Mabs) to this protein were generated. BALB/c mice were immunized with a purified OmpU of Vibrio cholerae fusing to six histidines, giving high serum titles specific to OmpU in all mice. Standard cellular fusion procedures were used to generate the hybridomas and the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was used to analyze all of them. Characterization of the obtained Mabs was made by Western blot and ELISA. Mabs were produced in ascites fluid and purified using affinity chromatography. Four hybridomas were obtained and characterized. Hybridomas 1F11 and 1B10 secreted antibodies of the IgM class, while Mabs from the hybridomas 3D8 and 9H12 belong to the IgG1 isotype. All Mabs recognize a 42 KDa antigen in Western blot corresponding to the product of the OmpU gene fused to a six Histidine tail. Additionally, MAbs produced by 3D8 selectively recognized a hidden epitope in the OmpU, due to the Mab did not recognize the intact protein in the surface of Vibrio cholerae. This is the first report for the production of specific Mabs to Vibrio cholerae OmpU
pdf: