Modificaciones genéticas en mutantes atoxigénicos de Vibrio cholerae O139 que mejoran sus propiedades como candidatos vacunales

Número: 
Autores/Authors: 
Talena Ledón, Celso Pérez, Javier Campos, Edith Suzarte, Karen Marrero, Boris Luis Rodríguez, Caridad Urra, Arlenis Moreno, Rafael Fando
Palabras Claves / Key words: 
vacunas, hapA, mshA, colonización, Vibrio cholerae O139, vaccine, hapA, mshA, colonization
Resumen: 
La hemaglutinina proteasa constituye un locus atractivo para la inserción de genes heterólogos que permitan la identificación de candidatos vacunales de Vibrio cholerae. Un mutante de Vibrio cholerae O139 previamente desprovisto de los genes de CTXφ fue secuencialmente manipulado mediante técnicas de ingeniería genética para obtener primero, derivados hapA::celA y después, clones con mejores propiedades de bioseguridad mediante una mutación en el gen mshA. La primera de las modificaciones consistió en la inserción del gen celA de Clostridium thermocellum el cual permite, mediante una técnica microbiológica sencilla, la distinción inequívoca del candidato vacunal de las cepas de Vibrio cholerae circulantes en la naturaleza. El gen mshA codifica la subunidad fundamental de la hemaglutinina sensible a manosa, fimbria que constituye el portal de entrada de varios vibrio-fagos, entre ellos VGJφ, el cual es capaz de transportar los genes de la toxina colérica entre diferentes cepas de Vibrio cholerae mediante un mecanismo de transducción especializada altamente eficiente. La caracterización genética de los mutantes se realizó mediante Southern blotting con sondas que reconocen específicamente los genes de interés. Los mutantes así obtenidos mantuvieron el fenotipo de mótiles de sus parentales y un buen nivel de colonización en el modelo del ratón neonato, aspectos esenciales para un candidato vacunal
Abstract: 
The hemagglutinin/protease represents an attractive locus for the insertion of heterologous tags which unequivocally distinguish vaccine candidates from wild type of Vibrio cholerae. An atoxigenic mutant of Vibrio cholerae O139 was sequentially manipulated using molecular biology methods to obtain hapA::celA derivatives which were later improved in their environmental safety by means of an mshA mutation. The celA gene from Clostridium thermocellum was used to tag the vaccine prototypes. The marked strains could be unequivocally distinguished using a simple microbiological technique. The mshA gene codes the main subunit of pilus MSHA that constitutes the portal of entry of several vibriophages, such as VGJφ which is able to carry the cholera toxin genes between different Vibrio cholerae strains by an efficient mechanism of specialized transduction. The mutants thus obtained resulted motiles and showed a good colonization capacity in the infant mouse cholera model, traits which are remarkable to vaccine candidates
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