Mutaciones que confieren resistencia a metronidazol y tetraciclina en Helicobacter pylori, su detección en aislados cubanos

Número: 
Autores/Authors: 
Orlando Reyes Zamora, Mayrín Hernández Power, Lino E. Torres Domínguez, Ludisleydis Bermúdez Díaz, Boris L. Rodríguez González.
Palabras Claves / Key words: 
H. pylori, resistencia, tetraciclina, metronidazol, terapia, resistance, tetracycline, metronidazole, therapy.
Resumen: 
La bacteria Helicobacter pylori es el agente causal de múltiples patologías gastroduodenales en los humanos. La infección con este microorganismo es tratada eficazmente con una combinación de dos antibióticos y un antiácido, sin embargo, la aparición de cepas resistentes a los principales antibióticos de las terapias, resulta el factor fundamental de las fallas terapéuticas. En el presente estudio se utilizó la técnica de PCR para amplificar y luego secuenciar el gen rdxA completo y un fragmento del gen ARNr16S, con el objetivo de detectar en ellos las mutaciones que tributan a la resistencia a metronidazol y tetraciclina, respectivamente. Se analizaron 37 cepas de H. pylori aisladas de biopsias gástricas de pacientes dispépticos cubanos procedentes del Centro de Investigaciones Médico Quirúrgicas. Al secuenciar el gen rdxA se encontraron 10 cepas (27 %) con mutaciones que confieren resistencia al metronidazol, otras cuatro cepas (10,8 %) con mutaciones que se han asociado a esta resistencia, una cepa (2,7 %) en la cual no se logró amplificar el gen rdxA por PCR y siete cepas más (18,9 %) con codones de parada no reportados anteriormente, pero que deben afectar también la función de la proteína RDXA y por tanto, tributan a la resistencia de H. pylori frente a este antibiótico. Consecuentemente, el valor estimado de resistencia al metronidazol en este estudio es de 45,9 % (17/37) y podría alcanzar un 62,2 % (23/37) si se sumaran las cepas con mutaciones asociadas a la resistencia y la cepa con el gen rdxA no amplificado por PCR. En la secuenciación del fragmento del gen ARNr16S solo se detectaron cinco cepas que tuvieron simples mutaciones en el codón AGA, para un 13,5 % de resistencia a la tetraciclina. Teniendo en cuenta, la resistencia potencialmente elevada al metronidazol y el relativamente pequeño número de cepas de H. pylori con capacidad potencial de resistir la tetraciclina en este estudio, se deberá evaluar la sustitución del metronidazol por la tetraciclina en la terapia erradicadora de H. pylori en Cuba.
Abstract: 
The bacterium Helicobacter pylori is the main agent causing gastroduodenal pathologies in humans. The infection with this microorganism is efficaciously treated with a combination of two antibiotics and one anti-acid, although, the appearance of strains resisting the antibiotics used in therapies, is the principal factor conducting to therapeutic failures. In this study, PCR amplifications and sequence analysis of the entire rdxA gene and a fragment of the ARNr16S gene were done to detect mutations involved in metronidazol and tetracycline resistance, respectively. H. pylori strains isolated from gastric biopsies of thirty seven Cuban dyspeptic patients belonging to Centro de Investigaciones Médico Quirúrgicas hospital were analyzed. The rdxA sequencing analysis rendered 12 strains (32.4 %) with mutations that confer metronidazol resistance, another four strains (10.8 %) with mutations that have been associated to this resistance and seven more (18.9 %) with stop codons, not reported before, that should also affect the RDXA protein activity, tributing to the H. pylori resistance to this antibiotic. Consequently, the estimated metronidazol resistance value in this study is 48.6 % (18/37) and could be increased up to 65 % (24/37) if all isolates with mutations will be added. Analysis of ARNr16S gene fragment sequences showed only five strains with simple mutations in the AGA codon, caused by the substitution of one of its bases, to a 13.5 % of tetracycline resistance. Taking into account, the potential high level of metronidazol resistance and the relative small number of H. pylori strains with the potential capacity to resist tetracycline of this study, a substitution of metronidazol by tetracycline in the H. pylori eradicating therapy used in our country should be evaluated.
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