Obtención de IgY Control

Número: 
Autores/Authors: 
Esteban Gutiérrez Calzado, Eduardo Cruz Mario, Mireya Garcia Garrido, Emilia Ortiz Beatón
Palabras Claves / Key words: 
IgY, anticuerpos policlonales, precipitaciones salinas, polyclonal antibodies, delipidate, saline precipitation, quality control
Resumen: 
La yema de huevo de gallinas puede ser utilizada como una fuente de anticuerpos, pero los lñpidos presentes en ella pueden interferir la actividad de los primeros, por esta razón, deben ser purificados de ella . Se conocen muchos métodos de purificación que pueden ser utilizados para obtener anticuerpos de pollo a gran escala . La posibilidad de purificar grandes cantidades de anticuerpos es de interés particular para la administración oral de anticuerpos especñficos para prevenir infecciones bacterianas y viral .es, especialmente, diarreas en viajeros, ademís de su uso también, en la prevención de estas entidades bacterianas y otras similares provocadas por rotavirus en diversos modelos animales entre las que se encuentran infecciones por Escherichia col• en conejos y puercos neonatos y caries dentales en ratas entre otras muchas . En este trabajo se reporta un método rípido y fícil de obtener Inmunoglobulina Y control a partir de yemas de huevo de gallinas no inmunizadas . El método consiste en la precipitación de los lñpidos de la yema con agua destilada estéril acidificada como primer paso en la obtención de la totalidad de las proteñnas solubles presentes en ella . Posteriormente, se realizan tres etapas sucesivas de precipitaciones salinas . La primera con sulfato de amonio y las dos restantes con sulfato de sodio, las cuales rinden finalmente, un preparado de IgY con elevado grado de pureza comprobado por electroforesis en gel de poliacrilamida. Con el método se recupera aproximadamente el 30 % de toda la inmunoglobulina presente en los sobrenadantes iniciales delipidados de la yema . La inmunoglobulina obtenida fue identificada por técnicas de inmunoprecipitación y puede ser utilizada como proteñna control en laboratorios donde se desarrolle la tecnologña de producción de anticuerpos policlonales en aves, ademís de constituir un preparado útil para su uso en posteriores trabajos de caracterización y estructura.
Abstract: 
Crude egg yolk may be used as an antibody source, but the lipids in the yolk may interfere with the antibody activity . Therefore, antibodies are usually purified from the yolk . There are several published purification methods that can be used for large-scale purification of chicken antibodies . The possibility of purifying large amounts of antibodies is of particular interest for oral administration of specific antibodies to prevent bacterial infections as travellers' diarrhea and other viral infections as rotavirus diseases . Lately, oral administration of egg yolk antibodies has also been successfully used for the prevention of bacterial infections in animal models . It has been used to prevent rotavirus infection in mice, Escherichia coli infections in rabbits and piglets, and caries in rats . A rapid and easy method to obtain control IgY from egg yolk of non-immunized hens is reported here . The principle of the method is lipidic precipitation of yolk using acidified water as the first step to obtain the whole soluble proteins of yolk, and later three steps of saline precipitations with ammonium sulphate (one step) and sodium sulphate (two steps) respectively. With this method it was obtained IgY highly pure as shown by SDS-PAGE . Approximately 30 % of total immunoglobulins present in initial delipidate's supernatants was recovered. The immunoglobulin obtained Was identified by immunodiffusion techniques and can be used as a control protein inlaboratories which develop the technology of production of avian polyclonal antibodies besides being a sample to be used later in works of characterization and structural studies.
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