Obtención de un conjugado anti IgG de ratón - FITC mediante la tecnología IgY para uso como anticuerpo secundario en la detección de antígenos de superficie celular

Número: 
Autores/Authors: 
Esteban J. Gutiérrez Calzado, Tomás Samón Chávez, Alejandro Miranda Ariza, George Fernández Duarte, David Higginson Clarke, Gustavo Sierra González, Rüdiger Schade
Palabras Claves / Key words: 
inmunoglobulina de yema de huevo, inmunoglobulina de gallina, anticuerpo de yema de huevo, anticuerpos aviares, IgY, egg yolk immunoglobulin, Hen’s immunoglobulin, egg yolk antibody, avian antibodies
Resumen: 
Desde el año 1996, el Centro Europeo para la Validación de Métodos Alternativos recomendó el uso de la IgY como sustituto de la IgG de mamíferos con el objetivo de reducir al mínimo las situaciones de daño que se les causa a los animales que se someten a la producción de anticuerpos (Acs). En 1999, la tecnología IgY se aprobó por la Oficina Federal Veterinaria del gobierno suizo como un método alternativo para sustentar el cuidado y bienestar de los animales. Muchas de las publicaciones relacionadas con IgY demuestran las características desde el punto de vista bioquímico de esta inmunoglobulina que la hace tomar ventajas sobre la IgG, entre las que refiere que los complejos inmunes que contienen Acs aviares, no pueden interactuar con los receptores Fc o del complemento sobre las células, por lo que el reemplazamiento de los Acs de mamíferos por sus similares en gallinas pudieran evitar interferencias en muchos ensayos diagnósticos. Este conocimiento ha sido la base objetiva de este trabajo que consistió en la obtención de Acs IgY anti IgG de ratón con elevado grado de pureza, los que fueron conjugados por unión covalente vía grupos amino primarios libres al isotiocianato de fluoresceína (FITC). Estos conjugados mostraron poseer una razón molar FITC/proteína en intervalos reportados para un buen desempeño. La dilución óptima de trabajo obtenida para ellos fue muy adecuada y demostró su utilidad como Acs secundarios en el conteo de antígenos de superficie celular linfocitario humano por sus resultados comparables con los reactivos similares de origen mamífero ensayados en paralelo
Abstract: 
Since 1996, the European Centre for Validation of Alternative Methods recommended the use of IgY for substitution of mammalian IgG to minimize harm situations in animal’s experimentation for the production of polyclonal antibodies. In 1999, IgY technology was accepted by Federal Veterinarian Office of Suiss Government as an alternative method to support the care and healthy status of animals. Many publications show that IgY takes advantage over IgG to avoid interferences in several immunological assays for the fact that immune complexes that contain avian antibodies do not bind Fc or complement receptors on cells and IgY could replace a similar IgG. This knowledge has been the basis of this work that has consisted of the conjugation of highly pure IgY anti mouse IgG with FITC by covalent junction via primary free amino groups of immunoglobulins. The conjugate obtained showed a good molar ratio FITC/protein for a recommended performance. The optimal working dilution obtained for the particular conjugate was rational demonstrating to be useful as secondary antibody in enumeration of human cellular surface antigens. The cellular enumeration was assayed simultaneously with similar reagents from mammalian source and results showed no significative differences by statistical analysis
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