Optimización de las condiciones de bombardeo para transformación genética de arroz (Oriza sativa) variedad Amistad 82

Número: 
Autores/Authors: 
Eduardo Menéndez, Juan Arrieta, Alberto Coego, Merardo Pujol, Yamilet Coll, Sergio Cjonziilez y Guillermo Selman.
Palabras Claves / Key words: 
arroz, transformación transiente, bombardeo de micropartículas, rice, transirnt transformation, microparticule bombardment
Resumen: 
En este trabajo se describe la obtención de expresión transiente de un gen reportero en explantes de la variedad cubana de arroz Amistad 82. Dicho gen fue introducido en embriones mediante el bombardeo con micropartículas de oro portadoras de ADN aceleradas con un flujo de helio. Se analizaron diferentes factores involucrados en la eficiencia de esta técnica. Se describe la influencia del tamaño de las partículas, su concentración y dispersión, así como la presión de helio y la distancia al tejido diana. Los mejores resultados del bombardeo al escutelo de embriones se obtuvieron con embriones somáticos bajo las condiciones siguientes: presión de helio 5 ·105 Pa, distancia de vuelo de 10 cm. tamaño de partícula 1,2 Fm, concentración de partículas por microlitro 0.25 106 y empleo de malla dispersora de 1 000 Pm Por otra parte, la plasmólisis parcial de los embriones aumentó la eficiencia de la transformación. Este resultado permite concluir que este método de transformación puede ser utilizado para el mejoramiento de la variedad de arroz Amistad 82 por medio de la Ingeniería Genética, mediante la introducción en la planta de genes que codifican caracteres de interés agrícola.
Abstract: 
This report describes the transient expression of a reporter gene in explants of the rice Cuban cultivar Amistad 82. The gene was introduced into embryos through bombardment with gold microparticles carrying DNA accelerated with a helium inflow gun. Several factors involved in the efficiency of this technique were analyzed. The influente of the transient reporter gene expression in explants from the Cuban rice cultivar Amistad 82 has been obtained. Several factors involved in the efficiency of the gene delivery by DNA particlt acceleration were analyzed. The influentes of the particle size, concentratlon, and dispersion as well as helium pressure and the distance to the target tissue are described. The bcst results were obtained by bombording somatic embryos with 1,2 Pm-size particles, at a concentration of 0,25 ·105 particles/mL, a pressure of 5 ·105 Pa, with the target tissue at a distance of 10 cm and baffle Inesh size of 1 000 Pm Transforrnation efficiency values obtained in this work lead to the conclusion that this method could be used for the improvement of the Cuban rice cultivar Amistad 82 trough Genetic Engineering by introducing into plan& genes coding for agricultural important traits.
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