Optimización del ensayo vibriocida colorimétrico para la determinación de anticuerpos séricos contra V. cholerae del serogrupo O139

Número: 
Autores/Authors: 
Joivier Vichi Lozada, Edith Suzarte Portal*, Talena Ledón Pérez, Rafael Fando Calzada.
Palabras Claves / Key words: 
ensayo vibriocida colorimétrico, Vibrio cholerae O139, optimización ensayo bactericida, título vibriocida, colorimetric vibriocidal assay, optimization bactericidal assay, vibriocidal titer.
Resumen: 
El título de anticuerpos vibriocidas es reconocido actualmente como el mejor marcador de inmunidad protectora ante la infección con Vibrio cholerae. Su evaluación permite estudiar la efectividad de vacunas durante ensayos preclínicos y clínicos, a través de la determinación de la funcionalidad de anticuerpos séricos, capaces de lisar células en presencia de complemento exógeno. Se han desarrollado distintos ensayos bactericidas con puntos finales y métodos de determinación del título vibriocida diferentes. La presencia de cápsula en el serogrupo O139 de Vibrio cholerae constituye un impedimento para la lisis eficiente de las células bajo condiciones del ensayo vibriocida utilizado en cepas del serogrupo O1. Por tal razón, se hace necesario adaptar los ensayos bactericidas existentes para V. cholerae O1, con la finalidad de utilizarlos con el serogrupo O139. A partir de un ensayo vibriocida colorimétrico, desarrollado para el serogrupo O1, se optimizaron las condiciones necesarias para una eficiente lisis celular del serogrupo O139 por anticuerpos específicos y el complemento. Este método colorimétrico tiene la ventaja que mediante la adición de glucosa y un indicador de pH al medio de cultivo utilizado para el crecimiento de las células sobrevivientes, puede determinarse visualmente el título de forma clara e inequívoca. Los mejores resultados se obtuvieron después del crecimiento de la cepa diana en cuñas de agar LB, al usar una concentración inicial de vibrión diana de 106 UFC/mL, una concentración inicial del complemento de 100 %, disolución salina fisiológica como diluente y tiempo de reacción de vibriolisis de una hora. Estas condiciones de experimentación permitieron obtener resultados exactos y precisos para V. cholerae O139.
Abstract: 
The vibriocidal titer is the best immunity marker recognized for protection against Vibrio cholerae. Its evaluation through the determination of serum antibodies that are functionally able to kill cells in the presence of exogenous complement, has gained a great importance for studying cholera vaccine protection efficacy during preclinical and clinical trials. Many versions of cholera bactericidal assay have been developed with different end points and different methods of determining the vibriocidal titer. The presence of capsule in serogroup O139 affects cell lysis efficacy under O1 vibriocidal assay conditions. Therefore, these conditions must be adapted to the O139 serogroup. From a vibriocidal colorimetric assay for serogroup O1, efficient cell lysis conditions for the serogroup O139 by the action of specific antibodies and complements were optimized. This colorimetric test has the advantage that glucosa and pH indicator addition to the culture media, where the surviving cells grow, makes posible to visually read the titer in a simple and clear way. The best results were achieved after growing initially the target strain in LB agar, having an initial concentration of target vibrios of 106 CFU/mL, an initial complement concentration of 100 % and physiological saline as assay diluent, being one hour the lytic reaction time. Under the above experimental conditions, the results were exact and precise for V. cholerae O139.
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