Producción de los antígenos ESAT-6 y CFP-10 de Mycobacterium tuberculosis y evaluación de sus potencialidades en el serodiagnóstico de la tuberculosis activa en una población cubana

Número: 
Autores/Authors: 
Elsa T. Pimienta Rodríguez, Caridad Rodríguez Valdés, Mónica Sarzo Gómez, Carlos Vallín-Plou
Palabras Claves / Key words: 
Mycobacterium tuberculosis, ESAT-6, CFP-10, serodiagnóstico, anticuerpos, serodiagnosis, antibodies
Resumen: 
Mycobacterium tuberculosis (Mtb) es el agente causal de la tuberculosis humana (TB), la cual es la enfermedad infecciosa de mayor prevalencia mundial causada por una bacteria. En el 2009 hubo un estimado de 9,4 millones de nuevos casos y se estima que un tercio de la población mundial está infectada con Mtb. Debido a esta situación, el diagnóstico temprano y eficaz de la TB es vital para controlar su expansión y mortalidad. En este trabajo se clonaron los genes esat-6 y cfp-10 del genoma de Mtb en los respectivos vectores plasmídicos pET3a y pET23d (Promega) de Escherichia coli. Ambas proteínas fueron expresadas en la fracción soluble, lo cual facilitó su purificación mediante la cromatografía de afinidad por quelatos metálicos en condiciones nativas con una pureza entre 90 - 94 %. Por primera vez, empleando la metodología de ELISA, se evaluó el potencial diagnóstico de estas dos proteínas recombinantes en una población cubana. La respuesta de anticuerpos reactivos contra ESAT-6 y CFP-10 recombinantes en los sueros de los enfermos fue significativamente mayor que la de los individuos sanos vacunados con BCG. El ensayo presentó una especificidad del 97,18 %, pero tuvo una baja sensibilidad del 32 %; valor que puedo estar relacionado con el tratamiento de los pacientes con los medicamentos antituberculosos. Este parámetro pudiera incrementarse mediante la inclusión de otros antígenos inmunogénicos en la mezcla, considerando que la respuesta a anticuerpos en los pacientes de TB es heterogénea.
Abstract: 
Mycobacterium tuberculosis (Mtb) is the etiological agent of human tuberculosis (TB), which globally is the most prevalent disease caused by a single bacterial pathogen. In 2009, worldwide there were an estimated 9,4 million of new cases and it is estimated that one third of the world population is latently infected with Mtb. According to this situation, some rapid and accurate diagnostic method is required for controlling the morbility and mortality of this disease. In this work, the genes esat-6 and cfp-10 were cloned in the E. coli plasmid vectors pET3a and pET23d (Promega), respectively. Both proteins were expressed in the soluble fraction, which facilitated their purification by means of the metal-chelate affinity chromatography under native conditions with a purity of 90 – 94 %. By the first time, using the methodology of ELISA, the serodiagnostic potential value of these two proteins was evaluated in a Cuban population. The antibody response against recombinant CFP-10 and ESAT-6 from the patients group was statistically higher than that from the healthy BCG-vaccinated individuals. The assays showed a specificity of 97,18 % and low sensitivity of 32 %, value that could be affected by the treatment of the patients with anti-TB drugs. This parameter might be increased by means of the inclusion of other immunogenic antigens in the cocktail, considering that antibody responses in TB patients are heterogeneous.
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