Determinación de esteroles en el ingrediente activo D-004 por CG-EM

Número: 
Autores/Authors: 
David Marrero Delange, Eduardo A. Rodríguez Leyes, Víctor González Canavaciolo, Yuliamny Adames Fajardo, Roxana Vicente Murillo
Palabras Claves / Key words: 
sterols, unsaponifiables, GC-MS, solvent extraction, D-004; esteroles, insaponificables, CG-EM, extracción con disolvente
Resumen: 

El D-004, es un nuevo extracto lipídico obtenido de los frutos de la palma real cubana (Roystonea regia), que ha mostrado ser efectivo en modelos experimentales de hiperplasia prostática. Teniendo en cuenta que las fracciones de esteroles usualmente acompañan a los extractos lipídicos en las Fuentes naturales, el objetivo de este trabajo fue estudiar los compuestos esterólicos que están presentes como impurezas en el D00-4 ingrediente activo (IA) por CG-EM. Nueve lotes fueron sometidos a saponificación con una disolución de KOH/EtOH y las fracciones insaponificables fueron extraídas con n-hexano. Las muestras fueron analizadas como derivados TMS utilizando MSTFA como reactivo silanizante. La identificación de los esteroles se llevó a cabo por CG-EM. Se encontró que el contenido de esteroles en el D-004 se encontraba entre 0,14 y 1,75 %. Esta fracción está principalmente compuesta por β-sitosterol (58,40 %), estigmasterol (9,52 %) y campesterol (9,23 %). Otras contribuciones importantes fueron las del Δ5-avenasterol (7,29 %), ciclolaudenol (5,57 %) y cicloartenol (4,09 %). Además, otros esteroles minoritarios fueron detectados, tales como el cicloartanol y el 24-metilen-cicloartanol así como otros compuestos con núcleos esterólicos los cuales no pudieron ser identificados debido a sus bajas concentraciones. Los análisis por CG-EM de la fracción insaponificable de D-004 permitieron conocer el contenido total de esteroles (< 1,75 %) y los esteroles principales (β-sitosterol, estigmasterol y campesterol) presentes en este IA.

Abstract: 

D-004, a new lipid extract obtained from the Cuban royal palm (Roystonea regia) fruits, has been shown to be effective in experimental models of prostate hyperplasia. Taking into account that sterols fraction usually accompany the lipid extracts from natural sources, the aim of this work was the study of the sterol compounds that are present as impurities in the D004 active ingredient (AI) by GC-MS. Material and Methods: Nine D004 AI batches were submitted to saponification with KOH/EtOH solution and the unsaponifiable fractions were extracted with n-hexane. Samples were analyzed as TMS derivatives using MSTFA as sylilating reagent. Identification of sterols was carried out by GC-MS. Results and Discussion: It was found that the D004 sterol content ranged from 0.14 to 1.75 %. This fraction is mainly composed of β-sitosterol (58.40 %), stigmasterol (9.52 %) and campesterol (9.23 %). Other important contributions were those of Δ5-avenasterol (7.29 %), cyclolaudenol (5.57 %) and cycloartenol (4.09 %). Furthermore, other minority sterols were detected, such as cycloartanol and 24-methylene-cycloartanol as well as other compounds with steroid nucleus which could not be accurately identified because of their low concentrations. Conclusion: The analyses by GC-MS of the unsaponifiable fraction of D004 allowed knowing the total sterol content (< 1.75 %) and the main sterols (β-sitosterol, stigmasterol and campesterol) present in this AI.

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