Linealidad, algo más que r2: un ejemplo práctico

Resumen

El trabajo se propuso mostrar a través de un sencillo ejemplo, cómo
la evaluación del coeficiente de determinación de la regresión r2
, no puede
considerarse el mejor parámetro para evaluar la linealidad de un procedimiento
analítico y su sola determinación no es suficiente para este fin. Se trabajó con
un ELISA tipo sandwich, empleado en la cuantificación y chequeo de diferentes
etapas del proceso de producción del IFNa2bHuLe. Se probaron cuatro curvas
en tres ELISA realizados en días y por operarios diferentes, las cuales cubrieron
seis concentraciones en el rango de 0,25 a 10 ng/mL . Se realizó análisis
de regresión por el MMC. Se graficaron los logaritmos de las concentraciones
contra los cocientes de las respuestas y concentraciones (DO/C), para cada concentraci
ón y curva estudiada. Como método complementario para evaluar la
calidad del ajuste en las diferentes rectas de regresión, se estimó la concentraci
ón de los diferentes puntos de las curvas ensayadas, por interpolación de sus
absorbancias promedio en las curvas de regresión, para su comparación con los
valores esperados o teóricos a través de los porcentajes de recuperación. Aún
cuando los r2calculados fueron superiores a 0,95 para todas las curvas ensayadas,
solamente para dos de estas no hubo falta de ajuste para niveles de significaci
ón del 5 y 1 %. Sin embargo, solo para una de estas curvas, el IC 95 % de la
pendiente estuvo incluido en el rango de tolerancia definido para su variación
en el rango lineal y correspondiente a ± 5 % según la ASTM. La graficación de
linealidad permitió visualizar las variaciones de la pendiente responsables de
la falta de linealidad (falta de ajuste) detectada para dos de las curvas. Se apreci
ó cómo para las concentraciones extremas de estas curvas (mínima y máxima),
la pendiente (cociente DO/C) tuvo una variación mayor que en la zona media.
Esta disminución de la pendiente para las concentraciones más bajas en la curva
patrón, lleva a errores cuando la mejor recta obtenida por el MMC es usada
para la cuantificación de muestras desconocidas con DO en esa zona, debido a
la falta de ajuste. Esto se apreció en los bajos porcentajes de recuperación obtenidos,
en la estimación de las concentraciones más pequeñas de las curvas con
falta de ajuste, a partir de sus rectas de regresión. La graficación de linealidad
resulta útil en la evaluación de linealidad, al visualizar la tendencia en la variaci
ón de la pendiente en todo el rango de concentraciones explorado y ofrecer
una primera idea acerca del rango de concentraciones en que el método es lineal.
El cálculo de r2 no obstante ser el método más frecuentemente usado en el
chequeo de la linealidad para un conjunto de datos en estudio y de ofrecer una
medida de la calidad del ajuste que se logra con la regresión, no es suficiente
para este fin. El análisis debe ser complementado con métodos alternativos como
la graficación de linealidad en un primer acercamiento, o el cálculo de los porcentajes
de recuperación para los diferentes puntos de la curva patrón y finalmente
confirmado a través de una dócima para la falta de ajuste.