Establecimiento de un protocolo experimental para determinar la adherencia in vitro de lactobacilos a las células intestinales

Resumen

El objetivo del presente trabajo fue establecer un protocolo experimental
para la determinación de la adherencia in vitro a células intestinales,
mediante el uso de aminoácidos marcados con tritio. Se conformaron
seis combinaciones a partir de dos medios de cultivo, 3H-alanina y 3H-leucina
para el marcaje de los lactobacilos, que sirvieron como punto de partida para
un diseño completamente aleatorizado con seis repeticiones para seleccionar
la variante óptima. Se estudió la estabilidad del marcaje de los
lactobacilos, el efecto de la actividad sobre ellos, así como la influencia del
tiempo de incubación a 37 °C sobre su adherencia en una suspensión de
células intestinales de cerdos sanos. Se desarrollaron ensayos para determinar
la dinámica de supervivencia de las células intestinales de cerdo, en los
cuales se alcanzó una satisfactoria supervivencia durante 4 h en estabilizador
fosfato a pH = 7,2 y 4 °C . El medio semisintético con 50 µL de 3H-alanina,
fue el seleccionado como óptimo para el marcaje del lactobacilo con una adecuada
incorporación del isótopo. La liberación de la actividad al medio fue
de menos del 2 % en 4 h, sin daños significativos para los lactobacilos con
los niveles de actividad utilizados. Se fijó un tiempo de incubación de 20 min
para el ensayo de adherencia y se utilizó un método indirecto para su determinaci
ón. Los resultados permitieron establecer un protocolo experimental
para la valoración de la adherencia de lactobacilos a las células intestinales
de cerdos utilizado el método de los indicadores radiactivos.