Secuencia nucleotídica completa del plasmidio suicida pSS1129

Resumen

La transferencia in vitro de material genético hacia Bordetella pertussis, agente etiológico de la tos ferina, se realiza mediante conjugación bacteriana desde cepas de Escherichia coli. El plasmidio suicida pSS1129 ha sido ampliamente utilizado para construir mutantes de B. pertussis. Este plasmidio además de poseer un origen replicativo de E. coli, tiene otro de transferencia, que permite su movilización desde una cepa conjugativa de E. coli hacia B. pertussis donde no puede replicarse y solo se conserva por integración en el cromosoma mediante recombinación homóloga. Adicionalmente, contiene marcadores que confieren resistencia a ampicillina y gentamicina, así como sensibilidad a estreptomicina, útiles para determinar el sitio de la integración bacteriana e intercambio de material genético. La secuencia nucleotídica de este plasmidio es desconocida. El presente estudio tuvo como objetivos establecer la secuencia nucleotídica del pSS1129, así como anotar los principales determinantes genéticos codificados en ella. El empalme de las secuencias obtenidas en Macrogen, Korea, generó una secuencia total de 9690 pb. Mediante búsqueda de homología en bases de datos internacionales, fueron identificados los genes bla, traJ, aacC1, rpsL y gcuP, el origen ColE1 de replicación y el origen de transferencia del plasmidio RK2, así como el sitio cos del fago lambda. También se localizaron varios sitios únicos de restricción útiles para la clonación de genes en este plasmidio. La secuencia nucleótidica del plasmidio pSS1129 determinada en este trabajo, facilitará su empleo en el diseño y obtención de nuevas generaciones de mutantes de B. pertussis con fines vacunales.